基本信息

货号：21411（25mg）

储存条件：-20℃避光防潮

简介

DiBAC4（3），DiBAC4（5）和DiSBAC2（3）是一组灵敏的慢响应膜电位探针，广泛用于测量许多生物系统的膜电位。 通常，慢反应探针在其跨膜分布中表现出潜在的依赖性变化，伴随着大的荧光变化。 它们的光学响应的幅度远大于快速响应探针的幅度（通常每mV的荧光变化为1％）。 包括阳离子羰花青，罗丹明和阴离子氧杂菁的慢反应探针适用于检测由呼吸活性，离子通道渗透性，药物结合和其他因素引起的非兴奋细胞的平均膜电位的变化。

物理化学特性

分子量：516.64

储存方式：DMSO

Ex=493nm

Em=516nm

染色细胞分析方案

简要概括

在生长培养基中制备细胞®

添加染料加载溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®

在室温或37 oC孵育30分钟至1小时®

读取荧光强度

在Ex / Em = 490 / 525nm（Cat。＃21411），590 / 632nm（Cat。＃21410）或540/590nm（Cat。＃21414）

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 它只提供指导，应根据您的具体需求进行修改。

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中以40,000至80,000个细胞/孔/100μL将细胞过夜用于96孔板或10,000至20,000个细胞/孔/25μL用于384孔板。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和MP染料加载溶液中（参见下面的步骤2.2），125,000至250,000细胞/孔/100μL，96- 对于384孔聚D赖氨酸板，聚d-D赖氨酸板或30,000至60,000细胞/孔/25μL。在实验之前以制动器关闭以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

2.准备DiSBAC2（3）染料加载溶液（1个板）：

2.1在高质量无水DMSO中制备10至30 mM的DiSBAC2（3）储备液。 应及时使用原液; 需要将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

2.2制备2X DiSBAC2（3）染料加载溶液：在实验当天，将DiSBAC2（3）固体溶解在DMSO中或将等份的DiSBAC2（3）储备溶液解冻至室温。制备2X工作溶液 在Hanks和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中，20至40μM，pH值为7，含有0.04％至0.08％Pluronic®F-127（Cat。＃20053）和2 mM Trypan Red Plus™（Cat。 ＃2456）。 通过votexing很好地混合它们。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

3.运行膜电位测定：

3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）DiSBAC2（3）染料加载溶液（来自步骤2.2）加入细胞板中。

注意1：如果您的筛选化合物干扰生长培养基和血清因子，在添加DiSBAC2（3）染料加载溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。

注2：染料加载后不要洗涤细胞。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意：在某些情况下，在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.3使用HHBS或所需缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度（Cat。＃21414）进行膜电位测定。

注意：在实验之前运行信号测试很重要。不同的乐器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使其信号测试强度在7,000到10,000左右。

数据分析

图1.在WSS-1细胞中用DiSBAC2（3）测量GABA剂量反应。 将WSS-1细胞以50,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 将细胞与100μLDiSBAC2（3）染料上样溶液在室温下孵育30分钟。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加GABA（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。